种苗繁殖是芦荟产业的重要组成部分。芦荟的自然繁殖周期长,雌雄花开不同步,种子小而少,种子育苗困难。传统上芦荟均采用吸芽分生繁殖和根、茎扦插繁殖,这些方法繁殖速度较慢,每株一年最多只能繁殖十几株,且易积累病苗,造成芦荟的退化,难以满足规模种植对种苗的需求。而采用组织培养快繁技术不仅能保持品种的优良特性,还可不受外界条件的影响,周年繁殖,在较短时间内,繁育出大批种苗。因此,组织培养技术对芦荟的繁殖具有很高的经济价值和广阔的市场前景。
首先是外植体的选择。外植体是指从植物组织或器官上切割下来并用于组织培养的原始体块,目前组织培养已经获得成功的植物,外植体几乎包括了植物体的各个部位。但是不同种类的植物以及同种植物不同的器官对诱导条件的反应是有差异的,有的部位诱导成功率高,而有的部位很难脱分化;有时,即使脱分化,再分化频率也很低,或者只分化出芽而不长根,或者只长根不长芽。因此,外植体的选择是组织培养中非常重要的一环。
其次是培养基的选择。培养基是活体植物组织体外保存、生长发育的营养来源。不同的植物都有自己最适合的组培培养基。专家认为,MS培养基适宜芦荟芽的分化和增殖培养。芦荟生根培养一般采用1/2MS培养基。改良的MS培养基对库拉索芦荟生根效果最好,生根率达100%。
三是芦荟的无性繁殖。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖,但难以快速、大量地繁殖种苗。对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗的技术可在短期内繁殖上百万株的种苗,具有成本低,效益高的特点。
四是芦荟茎尖培养。库拉索芦荟外植体的诱导,主要有两种途径:一是通过茎尖或茎段诱导腋芽产生不定芽而获得无菌苗增殖;二是通过茎尖或茎段诱导愈伤组织,再从愈伤组织诱导分化出不定芽,然后用不定芽增殖。从快速繁殖种苗的角度来看,以茎尖或茎段诱导腋芽产生不定芽的途径效果较好,因为芦荟通过茎尖诱导很容易诱导出不定芽,省去了诱导愈伤组织步骤,缩短了诱导时间,而且可以减少种苗变异率。不同芦荟品种进行组织培养时,其培养基最佳成分和比例不同。6-BA 2.5毫克/升和NAA 0.2毫克/升有利于库拉索芦荟不定芽的诱导,而IBA对芽的分化影响较大,尤其是高浓度的IBA不利于库拉索芦荟的增殖,对芽的分化有抑制作用。库拉索芦荟在开始启动分化及随后的1—2代培养中,可适当使用较高浓度的细胞分裂素,有利于加快繁殖,但如果长期使用高浓度的细胞分裂素容易使分化芽肿胀,愈伤组织增加,甚至出现白化苗现象。在第四代之后,需要逐渐减少生长调节剂使用量,以提高芽苗的增殖率。库拉索芦荟每一代培养最适宜天数在25—35天,小于25天或大于35天都不利芽苗生长;培养时期限在55天左右,若超过这个时限,芽苗会呈现衰老迹象。在大规模生产中,常常需要考虑降低生产成本,通常可采用食用糖代替蔗糖(化学纯或分析纯),自来水代替蒸馏水,自然光照代替人工光照等方法。组织培养中用食用糖代替蔗糖、用自来水代替蒸馏水,培养成本可降低30%。芦荟对光照条件要求不高,增殖期采用自然光照或人工光照皆可,但如果光照过强,加上温度过高,分化苗容易出现僵化,不利于芦荟苗快速繁殖。在工厂化生产过程中应采取自然光照,以节省生产成本。此外,温度也会对芦荟分化产生重要影响,温度过高或过低,都不利于分化。
五是芦荟茎段培养。采用极其幼嫩的顶芽茎尖分生组织作为外植体进行接种。